Fluorochrom-Bänderung

Für die DAPI-Bänderung wurden die Polytänchromosomen 10 min mit 4',6-Diamidin-2-phenylindol (DAPI) gefärbt.

Um eine farbliche Differenzierung in Form einer blau-rosa-weißen Bänderung zu erhalten, wurden die Präparate mit einem Gemisch aus DAPI und Propidiumiodid (DAPI/PI) gefärbt. Als Ausgangsmaterial dienten dazu vorbehandelte Präparate, die älter als 24 Stunden waren oder Präparate nach der FISH.

Durchführung

• frische Färbelösung herstellen und vor Licht geschützt aufbewahren
• Präparate mindestens über Nacht in 60 ml Färbelösung an einen dunkeln Ort bei RT stellen
• OT kurz in PBS abspülen und abtropfen lassen
• Präparate in jeweils 10 µl Einbettmedium einschließen und mindestens 30 min im Dunkeln liegen lassen bevor sie im Fluoreszenzmikroskop bei UV-Anregung (auch bei DAPI/PI) untersucht werden

Chemikalien und Lösungen

• DABCO: Diazabicyclo[2.2.2]octan (Sigma)
• DAPI-Stammlösung: 0,2 mg/ ml
• 4',6-Diamidin-2-phenyl-indol2HClH₂0 (Serva) in Aqua dest.
• Propidiumiodid-Stammlösung: 1 mg/ml Propidiumiodid in Aqua dest.
• Färbelösung: 20 µl DAPI-Stammlsg. und 20 µl PI-Stammlösung in 60 ml PBS
• PBS: 0,13 M NaCl, 0,007 M NaH₂PO₄, 0,03 M Na₂HPO₄, pH 7,4
• Einbettmedien entweder: a) Vectashield (Serva) oder b) 1 Teil Tris-HCl pH 7,4 und 9 Teile Glycerin mit 2,3% (w/v) DABCO und 0,02% NaN₃